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一個二化性家蠶醛酮還原酶基因的克隆及序列與表達分析
關鍵詞：醛酮還原酶 滯育準備 家蠶 表達
摘要：醛酮還原酶(aldo-keto reductase,AKR)超級家族成員以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸作為其輔酶,將醛酮類化合物還原成相應的醇類,其作用底物范圍廣泛,包括糖類、脂肪醛和甾體類激素等,在許多重要生物學反應中發(fā)揮關鍵作用。以二化性家蠶品系秋豐為材料,利用RT-PCR分別從滯育命運組和非滯育命運組克隆出AKR蛋白的cDNA序列。AKR蛋白序列由343個氨基酸組成,與黑腹果蠅和人的AKR分別有43%和38%的序列一致性?；诘鞍踪|序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示,家蠶AKR蛋白屬于AKR2E亞家族,其氨基酸序列與該家族成員序列一致性超過30%,故命名為AKR2E-like。將akr2e-like基因的cDNA序列克隆進表達載體pET-28a(+)中進行原核重組表達,SDS-PAGE電泳和Western blot分析顯示重組蛋白被成功表達。qRT-PCR分析表明,ark2e-like基因表達受發(fā)育環(huán)境調節(jié):在滯育誘導條件下,該基因在家蠶化蛹早期的表達量持續(xù)增加,在化蛹后第4天mRNA豐度達到最高值;而在非滯育誘導條件下,化蛹后ark2e-like基因表達量并無明顯波動。上述結果表明,ark2e-like基因有可能在家蠶二化性品系的滯育準備期起關鍵作用。
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