甲型流感病毒快速基因分型POCT方法的建立
關(guān)鍵詞：甲型流感 hybeacon探針 熔解曲線 paradna 基因分型
摘要：目的建立一種無(wú)需核酸提取,直接檢測(cè)鼻咽拭子中甲型流感病毒H1HA pdm09、H3HA亞型和季節(jié)性流感病毒H1HA non-pdm09的POCT快速分型方法。方法針對(duì)3種流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列保守區(qū)設(shè)計(jì)高度特異性的引物和HyBeacon探針,同時(shí)以人類(lèi)RNaseP基因作為內(nèi)參。優(yōu)化多重PCR反應(yīng)條件,建立用熔解曲線分析甲型流感病毒基因分型的方法,并將其應(yīng)用到ParaDNA核酸POCT檢測(cè)儀,對(duì)50例甲型流感病毒抗原初篩陽(yáng)性且經(jīng)過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的臨床鼻咽拭子標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果該方法可在1.5 h內(nèi)完成對(duì)3種甲型流感病毒亞型HA基因的特異性擴(kuò)增和分型,與其他7種呼吸道病原微生物無(wú)交叉反應(yīng),其核酸檢測(cè)下限為50 copies/μl。對(duì)臨床50例甲型流感病毒抗原陽(yáng)性的鼻咽拭子標(biāo)本進(jìn)行直接檢測(cè),檢出H1HA pdm09陽(yáng)性標(biāo)本48例,H3HA陽(yáng)性標(biāo)本2例,未檢出季節(jié)性流感H1HA nonpdm09陽(yáng)性標(biāo)本。結(jié)論基于HyBeacon探針和ParaDNA核酸POCT檢測(cè)儀所建立的甲型流感病毒快速分型方法能同時(shí)檢測(cè)H1HA pdm09、H3HA和季節(jié)性流感病毒H1HA non-pdm09。該方法無(wú)需核酸提取,操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)時(shí)間短,適于對(duì)甲型流感病毒抗原初篩陽(yáng)性的鼻咽拭子開(kāi)展現(xiàn)場(chǎng)基因分型檢測(cè),可為流感的診治和防控提供及時(shí)快速的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
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