大豆GmbZIP33基因啟動子的克隆及瞬時表達分析
關(guān)鍵詞：大豆 擬南芥 gus 維管組織特異性啟動子
摘要：啟動子作為基因調(diào)控的重要元件,決定著下游基因表達的時空和強度特性。為研究大豆GmbZIP33基因啟動子功能,在前期克隆獲得GmbZIP33基因(Glyma.03G219300.1)序列的基礎(chǔ)上,通過N-PCR(nested PCR)技術(shù)克隆了GmbZIP33 CDS上游啟動子區(qū)序列(2 316 bp)。利用PlantCARE在線分析軟件進行順式作用元件的預(yù)測,發(fā)現(xiàn)該序列上除含有TATA-box和CAAT-box等核心調(diào)控元件外,同時包括與抗逆、光響應(yīng)、激素響應(yīng)、蔗糖應(yīng)答元件和多個與組織特異性表達相關(guān)的元件。為研究GmbZIP33啟動子的表達調(diào)控特性,構(gòu)建了該啟動子調(diào)控報告基因GUS表達的載體,并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸染法將其轉(zhuǎn)入擬南芥中,發(fā)現(xiàn)該啟動子驅(qū)動下的GUS基因在不同組織(蓮座葉、花、莢果和根)的維管束中均特異性表達;對轉(zhuǎn)基因擬南芥進行實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),GUS基因在花中表達量最高,莢果中次之,表明GmbZIP33基因可能受到多種因素和蔗糖的調(diào)節(jié)并參與花莢發(fā)育的調(diào)控。
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