基于綿羊肺炎支原體EF-Tu蛋白間接ELISA方法的建立
關(guān)鍵詞：綿羊肺炎支原體 原核表達(dá) western blot 間接elisa
摘要：為解決綿羊肺炎支原體感染的預(yù)防問(wèn)題,建立一種簡(jiǎn)單、快速、成本低的診斷方法,構(gòu)建綿羊肺炎支原體EF-Tu基因原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)純化重組蛋白并用Western blot分析其反應(yīng)原性,以重組蛋白為診斷抗原,建立綿羊肺炎支原體間接ELISA檢測(cè)方法,評(píng)估其特異性和靈敏性。結(jié)果表明,構(gòu)建的重組蛋白純化后,經(jīng)Western blot證實(shí)具有良好的反應(yīng)原性;間接ELISA反應(yīng)條件優(yōu)化顯示,抗原稀釋度為0.25μg/mL,一抗最佳稀釋濃度為1∶50,最佳孵育時(shí)間為90 min,封閉液為50 g/L脫脂奶粉,二抗最佳稀釋倍數(shù)為1∶8 000,最佳孵育時(shí)間為60 min,特異性與靈敏性良好;該方法與間接血凝法對(duì)100份血清進(jìn)行檢測(cè),兩者符合率為88.7%。說(shuō)明試驗(yàn)建立的綿羊肺炎支原體間接ELISA檢測(cè)方法可以推廣使用。
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