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鴨坦布蘇病毒全長E蛋白可溶性表達及免疫原性分析
關(guān)鍵詞：鴨坦布蘇病毒 可溶性表達 免疫原性分析
摘要：鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)引起的一種以產(chǎn)蛋量和采食量嚴重下降為主要特征的傳染病。應(yīng)用RT-PCR方法擴增DTMUV GDHD2014-3毒株的囊膜(E)蛋白全基因序列,并將其克隆至原核表達載體pMAL-c5x,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒E-pMAL。將其轉(zhuǎn)化E.coli BL21感受態(tài)細胞,經(jīng)誘導(dǎo)表達條件優(yōu)化,在30℃條件下IPTG誘導(dǎo),可溶性表達重組的全長E蛋白(rf E),大小約110 ku。用Amylose Resin對目的蛋白進行純化,并將純化的rf E蛋白免疫Balb/c小鼠,制備多克隆血清抗體。經(jīng)Nu-PAGE以及Western blot分析,成功實現(xiàn)rf E蛋白可溶性表達,并能與DTMUV滅活疫苗免疫鴨血清多抗產(chǎn)生特異性反應(yīng)。間接免疫熒光試驗結(jié)果表明,rf E蛋白免疫小鼠獲取的多克隆血清抗體能與DTMUV反應(yīng)。實現(xiàn)了rf E蛋白的可溶性表達及純化,并驗證rf E蛋白具有良好的免疫原性,為DTMUV的亞單位疫苗的研制以及相關(guān)診斷試劑的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
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