產(chǎn)吡咯喹啉醌的生絲微菌內(nèi)參基因的篩選和驗(yàn)證
關(guān)鍵詞：吡咯喹啉醌 生絲微菌 內(nèi)參基因 實(shí)時(shí)熒光定量pcr
摘要：篩選生絲微菌表達(dá)調(diào)控研究中最適合的內(nèi)參基因,為后續(xù)大幅度提高吡咯喹啉醌(PQQ)產(chǎn)量打下基礎(chǔ)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)技術(shù)分析生絲微菌基因組中6個(gè)候選內(nèi)參基因的相對(duì)表達(dá)情況,通過(guò)Best-keeper、geNorm和NormFinder軟件分析,評(píng)價(jià)各個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性,確定最合適的內(nèi)參基因。結(jié)果表明:通過(guò)對(duì)生絲微菌4個(gè)不同生長(zhǎng)時(shí)期的6個(gè)候選內(nèi)參基因(16S rRNA、gapdh、recA、ldh、rpoB和S5)的轉(zhuǎn)錄情況進(jìn)行分析和評(píng)估,6個(gè)候選內(nèi)參基因均表現(xiàn)出較強(qiáng)的穩(wěn)定性和特異性,依據(jù)3款軟件的綜合評(píng)價(jià),確定gapdh、recA這兩個(gè)內(nèi)參基因在兩株菌株不同時(shí)期均能穩(wěn)定表達(dá)。從6個(gè)候選內(nèi)參基因中篩選出兩個(gè)表達(dá)穩(wěn)定的內(nèi)參基因gapdh基因和recA基因,用于后續(xù)生絲微菌的基因表達(dá)調(diào)控研究。
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