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中國(guó)水仙NtCCHC鋅指蛋白基因的克隆與原核表達(dá)
關(guān)鍵詞：中國(guó)水仙 鋅指蛋白 基因克隆 蛋白表達(dá)
摘要：【目的】利用建立的多效唑誘導(dǎo)中國(guó)水仙的SSH文庫(kù),克隆中國(guó)水仙NtCCHC鋅指基因的cDNA序列,進(jìn)行原核表達(dá),為深入研究NtCCHC鋅指基因在中國(guó)水仙中的功能奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā坎捎肨rizol法提取多效唑處理后的中國(guó)水仙葉片總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA后,根據(jù)已知的CCHC鋅指蛋白基因序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行基因克隆和同源性分析,并構(gòu)建原核表達(dá)載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。【結(jié)果】克隆一段810bp的cDNA編碼區(qū)序列,編碼269個(gè)氨基酸,同源性分析表明與多個(gè)物種的CCHC基因存在著較高的同源性,命名為NtCCHC。該基因能成功在p GEX-4T-3原核表達(dá)載體上實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)表達(dá),系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明:NtCCHC與中國(guó)蓮遺傳距離最近?！窘Y(jié)論】克隆了中國(guó)水仙NtCCHC基因序列,并成功誘導(dǎo)表達(dá)。
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