分離小麥麥谷蛋白亞基的幾個關鍵因素研究
關鍵詞：小麥 麥谷蛋白亞基 優(yōu)化 分離方法
摘要：小麥高分子量、低分子量麥谷蛋白亞基組成是影響小麥加工品質的重要因素,為了經濟快速鑒定小麥高低分子量麥谷蛋白亞基組成,需要不斷對提取和分離這些蛋白的方法進行優(yōu)化。在Singh等提出的提取分離小麥高低分子量麥谷蛋白亞基方法的基礎上,對其中涉及的單體蛋白去除、麥谷蛋白還原和烷化過程中使用的異丙醇濃度、烷化劑濃度以及烷化過程能否簡化幾個關鍵因素進行了深入研究。結果表明:在麥谷蛋白還原時,在10%~50%的異丙醇濃度范圍內,不同濃度的異丙醇對高分子量麥谷蛋白亞基的提取效果沒有差別,而低分子量麥谷蛋白亞基在用低濃度異丙醇提取時效果較差,隨異丙醇濃度提高,提取效果逐漸提高,異丙醇濃度提高到30%時,提取效果達到最高,異丙醇濃度繼續(xù)提高到50%,提取效果不再提高;使用30%和50%的異丙醇,去除單體蛋白的效果相同;把烷化劑直接加到樣品緩沖液中進行烷化,不同濃度(0.6%~1.4%)的烷化劑處理麥谷蛋白亞基的烷化效果相同,但烷化劑濃度為1.4%時電泳背景較重。優(yōu)化后的方法為:在單體蛋白去除和麥谷蛋白還原時把異丙醇濃度由原來的50%降為30%,去掉單獨的烷化步驟,把0.6%的烷化劑直接加到樣品緩沖液中進行烷化。優(yōu)化后的方法不但減少了試劑用量,簡化了提取步驟,還提高了電泳條帶強度。
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