結(jié)合區(qū)部分缺失的纖維素酶基因的克隆與表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)初步測(cè)定
關(guān)鍵詞：內(nèi)切纖維素酶 異源表達(dá) 結(jié)合區(qū) 酶學(xué)性質(zhì)
摘要：從梧桐腐枝上分離到一株可降解纖維素的細(xì)菌菌株,發(fā)現(xiàn)克隆于該菌株的內(nèi)切纖維素酶基因(egt)結(jié)合區(qū)部分缺失(8 bp),導(dǎo)致移碼并提前終止,全長(zhǎng)1 146 bp,編碼381個(gè)氨基酸,分子量為40.06 kD.克隆含有完整結(jié)合區(qū)的基因(eg),通過酶學(xué)性質(zhì)研究,表明兩者均僅具有羧甲基纖維素鈉活性,纖維素酶EGT和EG的最適反應(yīng)溫度分別為45 ℃和55 ℃,EGT更加耐高溫.最適pH均為7.0,都具有較好的pH穩(wěn)定性. Mn^2+、Fe^2+對(duì)兩者具有激活作用,Zn^2+、Ca^2+、K ^+、NH4^2+ 和Mn^2+對(duì)其都具有抑制作用.EGT的 K m=3.09 mg/mL,比酶活為98.4 U/mg;EG的 K m=8.654 mg/mL,比酶活為53.53 U/mg. EGT結(jié)合區(qū)的部分缺失導(dǎo)致酶與底物的親和能力更好,同時(shí)比酶活提高183%,水解能力更強(qiáng).
湖北大學(xué)學(xué)報(bào)·哲學(xué)社會(huì)科學(xué)版雜志要求:
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