外胚葉發(fā)育不全基因及其受體在斑馬魚(yú)牙齒早期發(fā)育中的表達(dá)
關(guān)鍵詞：外胚葉發(fā)育不全 外胚葉發(fā)育不全受體 牙齒發(fā)育 斑馬魚(yú) 原位雜交
摘要：目的探討外胚葉發(fā)育不全(EDA)基因及其受體(EDAR)基因在斑馬魚(yú)早期咽齒發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式,為進(jìn)一步研究其在牙齒發(fā)育過(guò)程中的功能奠定基礎(chǔ)。方法提取受精后48 h(48 hpf)的斑馬魚(yú)胚胎總RNA,之后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以該cDNA為模板,特異性擴(kuò)增斑馬魚(yú)咽齒特異性標(biāo)記基因dlx2b、Eda信號(hào)通路相關(guān)基因eda及edar基因片段,用TA克隆試劑盒將這3個(gè)基因片段分別連接到pGEMT載體上,將對(duì)應(yīng)質(zhì)粒用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)線性化,以PCR線性化做模板,選擇相應(yīng)的RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄,合成dlx2b、eda及edar基因的反義mRNA探針。收集36、48、56、60、72、84 hpf的斑馬魚(yú)胚胎,運(yùn)用全胚原位雜交技術(shù)檢測(cè)eda及edar基因在斑馬魚(yú)咽齒發(fā)育部位的表達(dá)分布。比較原位雜交結(jié)果eda及edar表達(dá)區(qū)域與斑馬魚(yú)咽齒特異性標(biāo)記基因dlx2b所指示咽齒部位的關(guān)系。結(jié)果獲得了dlx2b、eda及edar基因的反義m RNA探針。原位雜交結(jié)果顯示,48~72 hpf時(shí)eda及edar在鰓弓牙齒相應(yīng)部位可見(jiàn)強(qiáng)棕褐色陽(yáng)性信號(hào),與dlx2b所指示咽齒部位吻合。結(jié)論Eda信號(hào)通路配體與受體在斑馬魚(yú)咽齒早期發(fā)育過(guò)程中即牙齒發(fā)生至形態(tài)發(fā)生階段于咽齒部位特異性強(qiáng)表達(dá),這一結(jié)果顯示該信號(hào)通路可能參與斑馬魚(yú)咽齒早期發(fā)育的調(diào)控。
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