對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型的構(gòu)建
關(guān)鍵詞：對(duì)乙酰氨基酚 hepg2細(xì)胞 氧化應(yīng)激損傷 細(xì)胞模型
摘要：目的建立以對(duì)乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型。方法噻唑藍(lán)〔MTT〕法檢測(cè)HepG2細(xì)胞活力;微板法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和乳酸脫氫酶(LDH)的含量,細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD)及過(guò)氧化氫酶(CAT)活性;利用熒光探針(DCFH-DA)法對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平(ROS)進(jìn)行檢測(cè);JC-1染色法檢測(cè)不同濃度APAP對(duì)HepG2細(xì)胞線粒體膜電位的影響;Hoechst染色觀察細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果隨著APAP處理時(shí)間和濃度增加,HepG2細(xì)胞相對(duì)活力明顯降低,細(xì)胞數(shù)量減少,并伴隨著皺縮、變圓甚至漂浮等形態(tài)學(xué)變化;細(xì)胞培養(yǎng)液中的ALT、AST和LDH含量顯著升高,而細(xì)胞中的CAT和SOD活性明顯下降;另外,胞內(nèi)ROS水平和線粒體膜電位發(fā)生顯著變化,細(xì)胞凋亡顯著增加。誘導(dǎo)Hep G2細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷模型最佳條件為APAP濃度30mmol·L-1,細(xì)胞作用時(shí)間12h。結(jié)論本研究構(gòu)建了APAP體外氧化應(yīng)激細(xì)胞損傷模型,為保肝活性藥物篩選及其作用機(jī)制研究提供細(xì)胞學(xué)模型。
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