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WDR5真核表達載體的構(gòu)建及其在LNCaP細胞中的穩(wěn)定表達
關(guān)鍵詞：wdr5 真核表達 g418抗性 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
摘要：目的構(gòu)建人源WDR5全長結(jié)構(gòu)基因真核表達載體,建立穩(wěn)定表達WDR5的LNCaP細胞株.方法PCR擴增WDR5基因,將WDR5插入pCI-neo載體中,酶切及測序鑒定重組質(zhì)粒.利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染LNCaP細胞,Real Time-PCR檢測轉(zhuǎn)染細胞WDR5的m RNA表達水平.結(jié)果經(jīng)酶切及測序證實真核表達載體pCI-neo-WDR5構(gòu)建正確.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到LNCaP細胞后,用G418篩選獲得穩(wěn)定表達的細胞株,Real Time-PCR方法檢測到WDR5基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達.結(jié)論 PCI-neo-WDR5成功轉(zhuǎn)染LNCaP細胞株中并穩(wěn)定表達,為下一步WDR5的深入研究及應用奠定了基礎(chǔ).
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