WDR5真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在LNCaP細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)
段君君; 方峰; 張小玉; 王江; 賈霄; 何穎紅 云南省高校細(xì)胞生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院
關(guān)鍵詞：wdr5 真核表達(dá) g418抗性 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
摘要：目的構(gòu)建人源WDR5全長(zhǎng)結(jié)構(gòu)基因真核表達(dá)載體,建立穩(wěn)定表達(dá)WDR5的LNCaP細(xì)胞株.方法PCR擴(kuò)增WDR5基因,將WDR5插入pCI-neo載體中,酶切及測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒.利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染LNCaP細(xì)胞,Real Time-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞WDR5的m RNA表達(dá)水平.結(jié)果經(jīng)酶切及測(cè)序證實(shí)真核表達(dá)載體pCI-neo-WDR5構(gòu)建正確.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到LNCaP細(xì)胞后,用G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株,Real Time-PCR方法檢測(cè)到WDR5基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá).結(jié)論 PCI-neo-WDR5成功轉(zhuǎn)染LNCaP細(xì)胞株中并穩(wěn)定表達(dá),為下一步WDR5的深入研究及應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).
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