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基于熒光素酶報(bào)告基因的細(xì)菌外膜囊泡標(biāo)記方法的建立
關(guān)鍵詞：細(xì)菌外膜囊泡 外膜蛋白 熒光素酶
摘要：目的建立一種基于熒光素酶報(bào)告基因的細(xì)菌外膜囊泡標(biāo)記方法。方法利用細(xì)菌外膜囊泡表面攜帶高豐度細(xì)菌外膜蛋白A(OmpA)的特點(diǎn),構(gòu)建OmpA-NanoLuc熒光素酶融合蛋白,根據(jù)熒光素酶活性評(píng)估樣品中的細(xì)菌外膜囊泡數(shù)量。結(jié)果成功構(gòu)建OmpA-NanoLuc融合蛋白表達(dá)載體,受試菌株在表達(dá)該融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有穩(wěn)定的熒光素酶活性?？赏ㄟ^檢測(cè)熒光素酶活性的方式對(duì)細(xì)菌外膜囊泡進(jìn)行半定量檢測(cè)。結(jié)論建立了一種基于熒光素酶標(biāo)記的細(xì)菌外膜囊泡半定量檢測(cè)方法,可用于評(píng)估特定菌株的細(xì)胞外膜囊泡分泌水平。
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