不結球白菜BcSERK1基因的克隆及表達分析
關鍵詞：不結球白菜 bcserk1 克隆 序列分析 亞細胞定位
摘要：[目的]本文旨在研究不結球白菜BcSERK1基因及其在胚胎發(fā)生中的作用。[方法]采用同源克隆的方法從不結球白菜‘二樁白’中克隆到BcSERK1基因全長序列,利用生物信息學分析其結構特征,并與其他物種進行氨基酸序列比對和進化分析,同時利用基因槍介導的方法進行亞細胞定位;利用小孢子培養(yǎng)技術研究不結球白菜‘二樁白’和‘四九菜心’小孢子培養(yǎng)出胚情況;采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)分析BcSERK1基因在2個品種不同組織和在小孢子胚胎發(fā)生早期的表達特征。[結果]BcSERK1含有1個1 878 bp開放閱讀框,編碼625個氨基酸。與其他物種的氨基酸序列比對和系統(tǒng)進化分析結果顯示:BcSERK1在進化過程中保守程度較高,與甘藍型油菜親緣關系最近。亞細胞定位結果顯示:BcSERK1蛋白定位于細胞膜上。游離小孢子培養(yǎng)結果顯示:‘二樁白’出胚率較高,每蕾6.67個胚,而‘四九菜心’不出胚。RT-qPCR結果表明:BcSERK1在2個品種不同組織中均有表達,除根外‘四九菜心’的組織中其表達量均低于‘二樁白’;在小孢子胚胎發(fā)生早期,BcSERK1基因在‘二樁白’不同培養(yǎng)時間的表達量均高于‘四九菜心’。[結論]BcSERK1蛋白在進化過程中保守性較高,定位于細胞膜上;SERK1基因在2個不結球白菜品種中的差異表達表明該基因對胚胎發(fā)生具有重要作用。
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