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華蟾素油劑對肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外抑制活性及腫瘤微環(huán)境中對免疫細(xì)胞的影響
關(guān)鍵詞：華蟾素片 玉米油 蟾蜍噻嚀 蟾毒配基 生物利用度
摘要：目的考察玉米油及水對華蟾素片灌胃給藥后其活性成分在大鼠體內(nèi)被吸收情況和小鼠體內(nèi)抑瘤效果及對腫瘤微環(huán)境免疫細(xì)胞亞群的影響;驗(yàn)證華蟾素以口服油劑給藥更有利于其活性成分的吸收利用,提高抑瘤效果。方法以液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析結(jié)合對照品比對,鑒定華蟾素片劑中的活性成分,并對其進(jìn)行含量測定;選用人源肝癌HepG2細(xì)胞株,評價從華蟾素片中鑒定出的9個化合物對HepG2細(xì)胞的體外增殖抑制活性;藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)以華蟾素片的油劑和水劑給藥劑量為200 mg/kg和600 mg/kg(臨床折算劑量)的情況下,測定沙蟾毒精、蟾毒靈、和蟾蜍他靈、蟾毒他靈4個在體外對HepG2肝癌細(xì)胞增殖有強(qiáng)烈抑制作用的蟾毒配基成分以及華蟾素注射液中的主要成分蟾蜍噻嚀在SD大鼠血漿中的藥時濃度和藥代動力學(xué)參數(shù);藥效學(xué)研究以C57BL/6J小鼠的Hepa1-6細(xì)胞皮下腫瘤為模型,分別以玉米油、華蟾素片油劑和華蟾素片水劑,給藥劑量為320 mg/kg,灌胃2次/d,共21 d,測量3個實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤體積;并收集不同給藥組小鼠的脾臟和腫瘤組織,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分析華蟾素片油劑和水劑對脾臟和腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、骨髓來源的抑制性細(xì)胞(MDSCs)、PD1+CD8+T細(xì)胞分布的影響。結(jié)果從華蟾素片劑中鑒定出9個活性成分,分別為蟾蜍噻嚀、沙蟾毒精、和蟾蜍他靈、遠(yuǎn)華蟾蜍精、蟾毒他靈、華蟾毒他靈、蟾毒靈、華蟾酥毒基和酯蟾毒配基,并對其進(jìn)行了定量研究;體外HepG2細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)表明,8個蟾毒配基類成分及蟾蜍噻嚀均對HepG2肝癌細(xì)胞增殖有抑制作用;在大鼠中,華蟾素片油劑可明顯提高蟾蜍噻嚀的生物利用度,對蟾毒配基類成分的吸收也有一定促進(jìn)作用;小鼠接種Hepa1-6細(xì)胞成瘤后,給藥21 d后測量不同給藥組小鼠的腫瘤體積發(fā)現(xiàn),華蟾素片油劑的抑瘤效果顯著高于其水劑,并且無毒?
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