LRRC8A細(xì)胞模型的構(gòu)建及其生理特性研究
關(guān)鍵詞：lrrc8a 容積調(diào)控性陰離子通道 滲透壓 frt細(xì)胞
摘要：本文旨在構(gòu)建容積調(diào)控性陰離子通道主要成分LRRC8A的細(xì)胞模型,并應(yīng)用該模型研究LRRC8A的生理特性。構(gòu)建LRRC8A和YFP-H148Q/I152L真核表達(dá)載體,應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、抗生素篩選和有限稀釋,獲取共表達(dá)LRRC8A和YFP-H148Q/I152L的Fisher大鼠甲狀腺濾泡上皮(Fischer rat thyroid, FRT)細(xì)胞。倒置熒光顯微鏡觀察目的基因表達(dá)情況,熒光淬滅動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測LRRC8A和YFP-H148Q/I152L的功能。獲得用于研究LRRC8A容積調(diào)控性陰離子通道的細(xì)胞模型,并應(yīng)用該細(xì)胞模型研究LRRC8A的生理特性,包括陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)特性、滲透壓對LRRC8A的開放、陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)速度的影響以及氯離子通道抑制劑對LRRC8A的作用。結(jié)果顯示:(1)成功獲得共表達(dá)LRRC8A和YFP-H148Q/I152L的FRT細(xì)胞,該細(xì)胞模型可用于LRRC8A容積調(diào)控性氯離子通道生理特性的研究。(2)在低滲狀態(tài)下,LRRC8A容積調(diào)控性陰離子通道激活,可轉(zhuǎn)運(yùn)陰離子,如:碘離子和氯離子等;YFP-H148Q/I152L可用于研究陰離子的轉(zhuǎn)運(yùn)速度;滲透壓是LRRC8A容積調(diào)控性陰離子通道開放的調(diào)控因素,其開放與滲透壓呈負(fù)相關(guān);氯離子通道抑制劑對LRRC8A通道的轉(zhuǎn)運(yùn)功能具有抑制作用,并呈劑量依賴關(guān)系。上述結(jié)果提示,本研究成功構(gòu)建LRRC8A細(xì)胞模型,且應(yīng)用該模型研究顯示LRRC8A具有經(jīng)典的容積調(diào)控性陰離子通道的特性。
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