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紅曲霉LovD基因的克隆及轉(zhuǎn)基因高產(chǎn)洛伐他汀菌株篩選
關(guān)鍵詞：紅曲霉 洛伐他汀 根癌農(nóng)桿菌 遺傳轉(zhuǎn)化
摘要：通過紫外誘變篩選出的高產(chǎn)洛伐他汀紅曲霉菌株M120-1為出發(fā)菌株,提取紅曲霉菌株總RNA,通過RT-PCR技術(shù)克隆LovD基因,構(gòu)建表達(dá)載體,對紅曲霉進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化;通過高效液相色譜法篩選高產(chǎn)洛伐他汀轉(zhuǎn)化菌株。結(jié)果表明:提取紅曲霉總RNA并建立表達(dá)載體,隨機(jī)挑選出12個(gè)轉(zhuǎn)化子,經(jīng)PCR鑒定,有10株成功得到轉(zhuǎn)化。對其進(jìn)行培養(yǎng)并通過HPLC法測定洛伐他汀產(chǎn)量,其中一株轉(zhuǎn)化菌株的洛伐他汀產(chǎn)量為0.55mg/mL,比出發(fā)菌株產(chǎn)量高63%。對該菌株進(jìn)行傳代培養(yǎng),具有良好的遺傳穩(wěn)定性。
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