菊花CmDREBa-2基因的功能驗(yàn)證
關(guān)鍵詞：菊花 遺傳轉(zhuǎn)化 功能驗(yàn)證
摘要：為探究CmDREBa-2基因的抗性功能,了解CmDREBa-2調(diào)控菊花參與高、低溫防御反應(yīng)及響應(yīng)白色銹病的分子機(jī)制,構(gòu)建了過表達(dá)載體pBI121-CmDREBa-2,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化菊花'C029'。對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行45℃高溫、-4℃低溫及接菌處理后,觀察表型并分析下游基因表達(dá)量。結(jié)果表明:PCR檢測共獲得2個陽性植株,半定量與qRT-PCR表明CmDREBa-2成功高表達(dá)。在45℃的高溫脅迫處理下,轉(zhuǎn)基因株系存活率顯著高于野生型,并顯著提高了熱脅迫基因CmHsp90、CmHsfA2、活性氧清除基因SOD的表達(dá)。低溫脅迫處理下,轉(zhuǎn)基因株系OE-5,OE-8的存活率分別為90%和85%,而野生型僅為10%,同時,抗寒相關(guān)基因COR413、COR6.6和抗逆基因rd29a的表達(dá)較處理前升高,且高于野生型。接種白色銹病病原菌32h時,轉(zhuǎn)基因株系中CmDREBa-2的表達(dá)量激增,同時CmDREBa-2的過表達(dá)也不同程度地促進(jìn)了病程相關(guān)基因PR1和PDF1.2的表達(dá)。其中,PR1基因的表達(dá)更為明顯。綜上,CmDREBa-2可能直接或間接調(diào)控脅迫相關(guān)基因增強(qiáng)菊花對高溫脅迫和低溫脅迫的耐受性。CmDREBa-2通過SA介導(dǎo)的抗病信號途徑,參與菊花抵抗白色銹病反應(yīng)。
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