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蔗糖富集環(huán)境中蔗糖磷酸化酶的酶學性質研究與改造
關鍵詞：蔗糖磷酸化酶 酶學性質 分子改造 轉糖苷
摘要：【背景】蔗糖富集土壤是蔗糖磷酸化酶的重要來源之一。此酶能以較廉價的蔗糖為底物進行轉葡萄糖基反應,改善受體底物的理化性質,因而具有重要的應用價值。【目的】研究蔗糖富集土壤中蔗糖磷酸化酶的酶學性質和轉糖苷活性,為其更優(yōu)質的改造提供材料和理論基礎?！痉椒ā繉⒑昊蚪M中獲得的蔗糖磷酸化酶基因克隆到表達載體上構建重組大腸桿菌,誘導表達并進行鎳親和層析純化蛋白。以蔗糖為底物測量重組酶的基本酶學性質,研究其對糖類底物的轉糖苷活性。通過底物通道分析,利用反向PCR技術對其第155位點進行飽和突變,并測定突變體基本酶學性質和轉糖苷活性?！窘Y果】純化的酶蛋白分子量大小約為56 kD,活性狀態(tài)時以三聚體形式存在。在以蔗糖為底物時,最適溫度和最適pH值分別為55°C和6.5;Km和Vmax值分別為23.1±2.4 mmol/L和407.9±8.5μmol/(mg·min),對第155位點進行了定點飽和突變,獲得了部分酶學性質或轉糖苷活性改善的突變體。【結論】宏基因組中蔗糖磷酸化酶的研究豐富了酶學數(shù)據,并通過分子改造獲得了部分性質更優(yōu)的突變體,為轉糖苷活性關鍵氨基酸的研究和該酶的工業(yè)應用奠定了基礎。
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