NOC2L基因重組慢病毒表達載體的構建及其在293T細胞中的表達
關鍵詞：noc2l nir 慢病毒表達載體
摘要：目的構建NOC2L基因重組慢病毒并使其在293T細胞中表達。方法通過設計引物及PCR擴增獲得NOC2L全基因片段,將pCDH-GFP載體分別用XbaⅠ和BamHⅠ雙酶切制備線性化載體;NOC2L全基因片段和線性化載體經切膠回收后,通過同源重組反應將NOC2L全基因片段連接到線性化的pCDH-GFP載體上,構建pCDH-NOC2L-GFP慢病毒表達載體;通過菌落PCR、質粒雙酶切、測序等方法對構建的NOC2L基因重組慢病毒表達載體進行鑒定,利用構建的pCDH-NOC2L-GFP包裝NOC2L慢病毒并使用該慢病毒感染293T細胞。結果菌落PCR、質粒雙酶切和測序結果顯示成功將NOC2L基因連接到pCDH-GFP載體上,使用構建成功的pCDH-NOC2L-GFP轉染293T細胞,能夠成功轉染及包裝NOC2L基因重組慢病毒,同時包裝好的NOC2L基因重組慢病毒能夠成功感染293T細胞并過表達293T細胞中的NOC2L基因。結論采用本研究方法能成功構建NOC2L基因重組慢病毒表達載體。
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