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NOC2L基因重組慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其在293T細(xì)胞中的表達(dá)
關(guān)鍵詞：noc2l nir 慢病毒表達(dá)載體
摘要：目的構(gòu)建NOC2L基因重組慢病毒并使其在293T細(xì)胞中表達(dá)。方法通過設(shè)計(jì)引物及PCR擴(kuò)增獲得NOC2L全基因片段,將pCDH-GFP載體分別用XbaⅠ和BamHⅠ雙酶切制備線性化載體;NOC2L全基因片段和線性化載體經(jīng)切膠回收后,通過同源重組反應(yīng)將NOC2L全基因片段連接到線性化的pCDH-GFP載體上,構(gòu)建pCDH-NOC2L-GFP慢病毒表達(dá)載體;通過菌落PCR、質(zhì)粒雙酶切、測序等方法對(duì)構(gòu)建的NOC2L基因重組慢病毒表達(dá)載體進(jìn)行鑒定,利用構(gòu)建的pCDH-NOC2L-GFP包裝NOC2L慢病毒并使用該慢病毒感染293T細(xì)胞。結(jié)果菌落PCR、質(zhì)粒雙酶切和測序結(jié)果顯示成功將NOC2L基因連接到pCDH-GFP載體上,使用構(gòu)建成功的pCDH-NOC2L-GFP轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,能夠成功轉(zhuǎn)染及包裝NOC2L基因重組慢病毒,同時(shí)包裝好的NOC2L基因重組慢病毒能夠成功感染293T細(xì)胞并過表達(dá)293T細(xì)胞中的NOC2L基因。結(jié)論采用本研究方法能成功構(gòu)建NOC2L基因重組慢病毒表達(dá)載體。
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