納米熒光素酶的表達(dá)、純化及性質(zhì)鑒定
關(guān)鍵詞：納米熒光蛋白 原核表達(dá) 純化
摘要：由熒光素酶（luciferase）催化的一大類發(fā)光反應(yīng)被統(tǒng)稱為生物發(fā)光（bioluminescence），該反應(yīng)具有背景低、靈敏度高、線性范圍廣等特點，是高靈敏檢測的發(fā)展方向之一。課題組在近期的研究中全基因合成了一種納米熒光素酶（nanoluciferase），研究清楚了其理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，將其作為一種新型的生物發(fā)光檢測工具。將熒光素酶基因克隆至原核高表達(dá)載體上，通過自動誘導(dǎo)系統(tǒng)進(jìn)行了表達(dá)。通過Ni—NTA親和層析純化和分子篩將重組納米熒光素酶進(jìn)行純化，其產(chǎn)量可穩(wěn)定達(dá)到每升菌25．3mg，純度超過98％；通過酶活實驗鑒定了納米熒光素酶的活性，在1．0×10^-4～1．0×10^-ms／mE的范圍內(nèi)，該酶均具有良好的線性反應(yīng)，其線性檢測下限低至1．0×10^-4mg/mL（約5pmol）。納米熒光素酶具有靈敏度高、數(shù)據(jù)重復(fù)性好、操作簡便、穩(wěn)定性高、易于保存等多重優(yōu)點，可利用其作為基礎(chǔ)平臺，開發(fā)具有應(yīng)用前景的超靈敏新型生物發(fā)光探針。
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