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煙草合子時期表達基因NtZE1的克隆及結(jié)構(gòu)分析
關(guān)鍵詞：煙草 合子 基因克隆 生物信息學分析 基因表達活性檢測
摘要：通過分析煙草Nicotiana tabacum長形合子和卵細胞的cDNA差減文庫,獲得一條合子時期表達的基因NtZE1的EST序列。分析顯示,EST序列中含有315bp編碼序列,通過RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)成功克隆到該序列。生物信息學分析顯示,NtZE1基因編碼105個氨基酸殘基;NtZE1蛋白為不穩(wěn)定的親水性蛋白,具有信號肽;蛋白二級結(jié)構(gòu)多為α-螺旋,軟件預(yù)測該蛋白可能定位于細胞外。利用Genome walking技術(shù)獲得ATG起始密碼子前共2578bp的5’側(cè)翼序列(啟動子和5’UTR),將該序列連入EGFP核定位載體中并通過瞬時表達技術(shù)使其在小葉煙草N.benthamiana葉表皮細胞中表達,有明顯的綠色熒光,證實所獲得的5’側(cè)翼序列具有啟動基因表達的活性。
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