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13C6-酪氨酸標(biāo)記的蛋清溶菌酶的表達(dá)及NMR測(cè)定
關(guān)鍵詞：選擇性標(biāo)記 nmr 蛋清溶菌酶 酪氨酸 蛋白質(zhì)的表達(dá)純化
摘要：針對(duì)蛋白質(zhì)核磁共振(NMR)信號(hào)復(fù)雜難以解析的問題,選用選擇性標(biāo)記方法可簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)NMR譜圖。本實(shí)驗(yàn)以蛋清溶菌酶(HEL)為目標(biāo)蛋白,構(gòu)建了pET-HEL蛋白表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入到大腸桿菌Ε.coliBL21(DE3)中,得到重組菌株。然后通過改變誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)濃度以及誘導(dǎo)時(shí)間等條件來優(yōu)化HEL在大腸桿菌Ε.coliBL21(DE3)中的表達(dá)條件,通過SDS-PAGE電泳分析,確定了最佳表達(dá)條件:37℃、0.4mmol/LIPTG誘導(dǎo)8h。按最佳條件于誘導(dǎo)前加入13C6-酪氨酸進(jìn)行選擇性標(biāo)記,擴(kuò)大表達(dá),經(jīng)過變復(fù)性處理與Ni柱純化后,獲得選擇性標(biāo)記的HEL。進(jìn)一步制備標(biāo)記蛋白核磁樣品進(jìn)行測(cè)定,得到簡(jiǎn)化的NMR譜。本研究為采用NMR簡(jiǎn)化分析蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)奠定了基礎(chǔ)。
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