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幽門螺桿菌ddlA基因的克隆及生物信息學(xué)分析
關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌 基因克隆 生物信息學(xué)
摘要：目的克隆幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)D-丙氨酸-D-丙氨酸連接酶A(D-alanine-D-alanine ligase A, DdlA)基因ddlA編碼區(qū),并對其進行測序和生物信息學(xué)分析。方法以MEL-Hp27菌株基因組DNA為模版,PCR擴增ddlA基因編碼區(qū);將ddlA基因與真核表達載體pcDNA3.1(+)連接,構(gòu)建重組表達載體;測序獲得ddlA基因序列,利用生物信息學(xué)軟件對編碼DdlA蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點進行分析。結(jié)果 MEL-Hp27 ddlA基因的編碼區(qū)長為1 044 bp,編碼347個氨基酸;編碼的DdlA蛋白是一種性質(zhì)穩(wěn)定的親水蛋白,相對分子質(zhì)量為39.61×10~3,屬于D-ala-D-ala連接酶N端家族;DdlA蛋白無跨膜區(qū)和信號肽,具有磷酸化位點和O-糖基化位點;二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋占36.02%,無規(guī)卷曲Cc占42.36%,延伸鏈Ee占18.73%,β-轉(zhuǎn)角Tt占2.88%。DdlA蛋白含有7個B淋巴細胞和15個CTL細胞相關(guān)抗原表位。結(jié)論成功克隆了Hp27 ddlA基因,構(gòu)建了該基因的真核表達載體,表達的DdlA蛋白含有B、T淋巴細胞抗原表位,為研究Hp DdlA蛋白基因在Hp感染致病及防治中的作用提供了理論依據(jù)。
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