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      一種側(cè)流試紙結(jié)合FAM重組酶聚合酶擴增(RPA)診斷布魯氏菌感染的方法

      葛志毅; 周建華; 尚佑軍; 李學(xué)瑞; 劉永生; 趙鷺; 孫晶晶; 曹小安 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室; 蘭州730000

      關(guān)鍵詞:布魯氏菌 rpa 側(cè)流試紙 田間檢測 

      摘要:目的為了更加方便布魯氏菌病(布病)檢測,增加布病檢測方法的多樣性。方法根據(jù)布魯氏菌特異基因的保守序列,設(shè)計引物與探針,利用Twist Amp? nfo試劑盒提供的聚合酶擴增體系對布魯氏菌基因組進行快速等溫擴增,擴增產(chǎn)物用PCRD試劑盒側(cè)流試紙進行檢測,進而判斷結(jié)果。其實驗過程為確定最佳反應(yīng)條件,檢測特異性和敏感性,并與QPCR同時檢測樣品,比較符合率。結(jié)果 38℃反應(yīng)10 min為最佳條件,特異性結(jié)果良好,敏感性能達到10-5(8拷貝),與QPCR檢測結(jié)果符合率高,以此建立本方法。結(jié)論該方法具有特異性強、敏感性好、操作過程簡單、檢測快速等優(yōu)點,增加了布病檢測方法的多樣性,同時為野外田間布病的檢測提供了一種可能。

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