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豬細(xì)小病毒7型SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法的建立及臨床樣品的檢測
關(guān)鍵詞：豬細(xì)小病毒7型 實(shí)時(shí)熒光定量pcr 衣殼蛋白基因
摘要：采用PCR方法擴(kuò)增豬細(xì)小病毒7型(PPV7)衣殼蛋白基因保守區(qū)域493 bp,將其克隆到pMD18-T載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒,以其為模板建立用于檢測PPV7的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)PCR檢測方法,并驗(yàn)證其靈敏性、特異性和重復(fù)性。結(jié)果表明,本試驗(yàn)建立的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法在2.85×10^1~2.85×10^8拷貝/μL呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.995,斜率為4.158,靈敏度可達(dá)到2.85×10^1拷貝/μL。該方法對于豬繁殖障礙性傳染病常見病原如PRRSV、PCV2和PRV未出現(xiàn)特異性擴(kuò)增,表明特異性好。所有標(biāo)準(zhǔn)曲線在溶解溫度為83.103℃時(shí)出現(xiàn)單一的特異峰。使用本方法檢測了2017年山東地區(qū)7家養(yǎng)豬場216份臨床樣品,總陽性率為12.5%。
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