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人支氣管上皮HBE細胞中p53相關的放射誘導表達長鏈非編碼RNA的鑒定和生物功能預測分析
關鍵詞：長鏈非編碼rna p53 支氣管上皮細胞
摘要：目的鑒定人支氣管上皮HBE細胞中p53相關的γ射線誘導表達的長鏈非編碼RNA(lncRNA)分子,為研究與p53關聯(lián)的lncRNA分子在放射損傷反應如上皮間充質轉化中的作用機制提供信息。方法使用CRISPR-Cas9基因編輯技術構建p53敲除的人支氣管上皮細胞(HBEp53-/-),Western印跡法檢測P53表達水平,lncRNA芯片雜交分析lncRNA表達譜的改變,實時定量RT-PCR分析驗證部分lncRNA分子的表達變化,生物信息學技術分析差異變化lncRNA的生物學功能。結果與野生型HBE細胞相比,HBEp53-/-細胞在照射后有239條lncRNA出現(xiàn)上調表達,287條出現(xiàn)下調表達。上調和下調表達前5位lnc RNA的差異表達變化經PCR得到驗證。生物信息學GO分析表明,前10位差異表達的lncRNA的靶基因主要涉及β3腎上腺素受體結合蛋白、酪氨酸激酶活性蛋白、DNA結合蛋白、鋅離子跨膜轉運體蛋白、突觸融合蛋白結合蛋白和泛素結合蛋白等分子功能。KEGG分析表明,差異表達lnc RNA的靶基因功能的生物體系統(tǒng)主要涉及感知、神經、免疫、內分泌、環(huán)境適應、發(fā)育和循環(huán)系統(tǒng)等。結論鑒定了人支氣管上皮HBE細胞中與p53相關的放射誘導lncRNA分子;經生物信息學預測,發(fā)現(xiàn)這些lncRNA分子在細胞照射應答過程中,涉及多種生理功能,參與多個功能信號通路。
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