抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白的制備、鑒定及理化特性分析
關(guān)鍵詞：紫單胞菌 齦 免疫球蛋白類(lèi) 動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)
摘要：目的制備牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）的卯黃免疫球蛋白（immunoglobulin yolk，IgY）并評(píng)價(jià)其理化性質(zhì)，以期為采用被動(dòng)免疫抗體防治慢性牙周炎尋找新途徑。方法厭氧培養(yǎng)聘國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33277，收集細(xì)菌，超聲振蕩至菌體完全破碎，離心，收集上清液，即為全菌可溶性蛋白抗原。羅曼母雞隔離飼養(yǎng)至5個(gè)月齡用于抗體的制備。以質(zhì)量濃度為1g／LPg全菌可溶性蛋白抗原1ml與等量弗氏完全佐劑吹打混勻成油包水狀注射劑，經(jīng)皮下和肌肉多點(diǎn)注射免疫母雞，共注射免疫4次，每次免疫間隔時(shí)間為10d。初次免疫即開(kāi)始收集雞蛋，標(biāo)記后4℃保存。提純免疫后不同時(shí)間的抗Pg-IgY，二喹啉甲酸總蛋白定量法測(cè)定蛋白濃度，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析鑒定，間接酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法進(jìn)行IgY抗體效價(jià)變化和理化性質(zhì)的檢測(cè)。結(jié)果通過(guò)免疫誘導(dǎo)出質(zhì)量濃度為2．05g／L的特異性IgY，經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)得相對(duì)分子質(zhì)量分別為65000的重鏈和25000的輕鏈，與理論值一致；間接ELISA法結(jié)果顯示初次免疫后5d左右出現(xiàn)抗Pg-IgY，免疫后50～55d達(dá)峰值；抗體效價(jià)達(dá)到1：100000以上；一個(gè)雞蛋可以生產(chǎn)超過(guò)10mg的IgY，純度高達(dá)95％。結(jié)論P(yáng)g全菌蛋白免疫產(chǎn)蛋母雞可使雞蛋產(chǎn)生高效價(jià)、高濃度的特異性IgY，該抗體純度高、耐熱、耐酸堿，理化性質(zhì)穩(wěn)定，適合口腔環(huán)境。
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