鐵線蓮屬植物ISSR-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化及遺傳多樣性分析
關(guān)鍵詞：鐵線蓮屬 反應(yīng)體系優(yōu)化 遺傳多樣性
摘要：對(duì)鐵線蓮屬(Clematis Linn.)植物基因組DNA的ISSR-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化,并采用ISSR分子標(biāo)記對(duì)32個(gè)鐵線蓮屬植物(包括8個(gè)野生種、1個(gè)變種和23個(gè)品種)及2個(gè)近緣屬植物的遺傳多樣性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示:鐵線蓮屬植物基因組DNA ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系的總體積為25.0μL,包括40 ng·μL^-1模板DNA 1.0μL、0.4μmol·L^-1引物1.0μL、0.15 mmol·L^-1dNTPs 2.0μL、10×Ex Taq Buffer(Mg2+ Plus) 2.0μL、TaKaRa Ex Taq酶0.2μL和ddH2O 18.8μL。對(duì)32個(gè)鐵線蓮屬植物及2個(gè)近緣屬植物基因組DNA的ISSR-PCR分析結(jié)果顯示:共擴(kuò)增出172個(gè)條帶(位點(diǎn)),平均每條引物擴(kuò)增出13.2個(gè)位點(diǎn),其中,多態(tài)性位點(diǎn)168個(gè),平均每條引物擴(kuò)增出12.9個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),平均多態(tài)性位點(diǎn)百分率為98.2%。聚類分析結(jié)果顯示:32個(gè)鐵線蓮屬植物及2個(gè)近緣屬植物的遺傳距離在0.22~1.21之間。在遺傳距離1.02處,將32個(gè)鐵線蓮屬植物分為3個(gè)大組,‘杰出’(‘Superba’)單獨(dú)聚為1個(gè)大組,‘斯托爾韋克’(‘Stolwijk Gold’)和‘檸檬之夢(mèng)’(‘Lemon Dream’)聚為1個(gè)大組,其余植物聚為第3大組;在遺傳距離0.92處,將第3大組進(jìn)一步劃分為3個(gè)亞組,第1亞組包括‘阿迪森’(‘Addisonii’)、‘帕斯卡’(‘Pascal’)和‘櫻桃唇’(‘Cherry Lip’),第2亞組包括短柱鐵線蓮(C.cadmia Buch.-Ham. ex Wall.)、灰葉鐵線蓮[C.canescens(Turcz.) W. T. Wang et M. C. Chang]、毛蕊鐵線蓮(C.lasiandra Maxim.)、曲柄鐵線蓮(C.repens Finet et Gagnep.)、‘鈴兒響叮當(dāng)’(‘Jingle Bells’)和‘雀斑’(‘Freckles’),第3亞組包括吳興鐵線蓮(C.huchouensis Tamura)等20個(gè)鐵線蓮屬植物;在遺傳距離0.77處,將第3亞組劃分為7個(gè)小組。研究結(jié)果表明:ISSR分子標(biāo)記能夠應(yīng)用于鐵線蓮屬植物的遺傳多樣性分析。
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